В автоматизованому секвенуванні Сенгера, комп’ютер зчитує кожну смужку капілярного гелю по порядку, використовуючи флуоресценцію для ідентифікації кожного терміналу ddNTP. Коротше кажучи, лазер збуджує флуоресцентні мітки в кожній смузі, а комп’ютер виявляє випромінюване світло.
Аналіз секвенування за Сенгером виконується на основі порівняння, коли електроферограма пацієнта порівнюється з електроферограмою зразка ДНК без мутації. Будь-які спостережувані відмінності між двома слідами реєструються та аналізуються на предмет потенційного патогенного впливу на білок.
Секвенування Сангера є швидкий, економічно ефективний спосіб зчитування послідовності невеликих цільових ділянок геному. Він широко використовується для перевірки відомих сімейних варіантів, для підтвердження результатів, отриманих за допомогою NGS, і для секвенування окремих генів.
Секвенування Сангера є надійна стратегія тестування, здатна визначити наявність точкової мутації чи невеликої делеції/дуплікації. Він широко використовувався протягом кількох десятиліть у багатьох ситуаціях, включаючи визначення мутаційного спектру пухлини, а також визначення конституційного варіанту в діагностичному тестуванні.
Щоб прочитати гель, ви подивіться на темні смуги в кожній колонці. Для кожного типу нуклеотидів (G, C, A, T) є один стовпчик. Зчитуючи послідовність смуг, можна визначити послідовність нуклеотидів. Зліва: рентгенівський знімок, який показує стовпці та смуги для чотирьох нуклеотидів.
Основи зчитуються в порядку зліва направо і зверху вниз (на хроматограмі, що містить більше одного рядка інформації). Цей порядок відповідає від 5'-кінця секвенованої ДНК до 3'-кінця. Такі рівномірно розташовані чіткі піки роблять базовий виклик простим і однозначним.